液相色譜柱柱體積怎么算？計算公式！

液相色譜柱的柱體積(Column Volume, Vm?)是色譜分析中的重要參數，直接影響分離效率、保留時間及流動相流速的設置。以下是其計算公式及關鍵參數解析：

一、理論柱體積計算公式

參數含義：

d：色譜柱內徑(單位：cm)

L：色譜柱長度(單位：cm)

?：柱內填料的孔隙率(無量綱)

對于全多孔填料：?≈0.7(顆粒內孔隙率約 0.4.顆粒間孔隙率約 0.3)

對于核殼型填料：?≈0.6(因內部實心結構，總孔隙率較低)

二、簡化實用公式

在實際應用中，若忽略填料孔隙率(僅計算柱管內部體積)，可簡化為：

單位換算：

若內徑 d 為 mm，長度 L 為 cm，則：

三、實驗測定方法

理論計算值與實際值可能存在偏差(因填料裝填密度、孔隙率差異)，推薦通過實驗測定：

1. 示蹤劑法

注入不保留物質(如尿嘧啶、硝酸鈉)，記錄其出峰時間 t0?(死時間)。

實際柱體積： Vm?=F×t0? (F 為流動相流速，單位：mL/min)

2. 溶劑置換法

用甲醇充滿色譜柱，測量流出甲醇的體積(需扣除管路死體積)。

四、關鍵應用場景

1. 梯度洗脫設置

梯度時間通常設置為 5-20 倍柱體積。例如，15 分鐘梯度對應 10 倍柱體積(流速 1 mL/min 時，柱體積約 1.5 mL)。

2. 柱平衡判斷

更換流動相后，需沖洗 5-10 倍柱體積確保平衡。例如，4.6 mm 柱需沖洗 12-25 mL。

3. 樣品體積限制

進樣體積一般不超過 1% 柱體積，避免過載。例如，2.5 μL 對于 2.5 mL 柱體積。

五、注意事項

1. 填料類型影響

全多孔填料柱體積 > 核殼型填料(因孔隙率差異)。

鍵合相厚度會減小柱內空間(如 C18 鍵合相比 C8 鍵合相柱體積略小)。

2. 溫度與壓力影響

高壓下柱體積可能縮小約 2%-5%(彈性柱管形變)。

高溫下溶劑膨脹可能增加體積。

3. 計算公式選擇

理論計算用于初步估算。

實驗測定值更適用于精確方法開發。

通過準確計算或測定柱體積，可優化色譜條件，提升分離效率與結果重現性。